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DNA001: ss-DNA

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Monoklonale Antikörper

Herkunft:	Maus

Isotyp:	IgM

Klon:	F7-26

Form:	Gereinigtes Immunglobulin in PBS mit 5% FBS, ohne Konservierungsmittel

Menge:	50 µg

Konzentration:	100 µg/ml

Arbeitskonzentration:	1:10 bei anti-IgM:HRPO als 2. AK

Immunogen:	ss-DNA aus Kälber-Thymus

Spezifität:	Desoxycytidin in ssDNA (25-30 Basenpaare erforderlich)

Artspezifität:	Nicht artspezifisch

Allgemeines:	Apoptose ist ein genetisch und biochemisch regulierter Vorgang des programmierten Zelltodes. Dieser Vorgang spielt eine wichtige Rolle bei einer Reihe von Erkrankungen wie Krebs, Autoimmunerkrankungen, neurologischen und kardiovaskulären Erkrankungen sowie Infektionen. Proteolytische Prozesse während der Apoptose führen zu thermischer Instabilität der DNA und ihrer Denaturierung.

Spezielle Eigenschaften:	Der Antikörper F7-26 reagiert spezifisch mit Einzelstrang-DNA (ssDNA) und ist ideal für den Nachweis apoptotischer Zellen in Suspension oder in immunhistochemischen Verfahren. Der Antikörper bindet nicht an doppelstänige DNA. Im Gegensatz zur TUNEL-Methode ist der Nachweis von ssDNA mit spezifischen Antikörpern ein sicheres Anzeichen für Apoptose, da nekrotische Zellen nicht erfaßt werden.

Positivkontrolle:	Tumorgewebe

Vorbehandlung:	4% oder 10% gepuffertes Formalin bei 4 °C für max. 24 hr. Dehydrieren, Paraffineinbettung, 3-4 µm Schnitte auf Adhäsionsobjektträger aufziehen, trocknen bei 56-60 °C, Entparaffinieren. Saponin (0,1 mg/ml in PBS) für 20 min, Proteinase K (20 mg/ml in PBS) für 20 min, Waschen, 50% Formamid in a.d. 20 min bei 56-60 °C (Temeraturkontrolle in der Kuvette!). Eiskaltes PBS 5 min. Blockierung der endogenen Peroxidase (5 min in 3% Peroxid); Blockierung der unspez. Proteinbindung mit 3% fettfreiem Milchpulver 5 min, 1:10 verdünnter Primärantikörper in 1% fettreiem Milchpulver in PBS. -Aliquots dieser Lösung bei -20 °C lagern; Anti-Maus-IgM:HRPO (z.B. Art.-Nr. BL-STAR86P) 15 min. Diese Methode gibt weniger Hintergrund als die Avidin/Biotin-Methode.

Anwendung:	Der Antikörper ist auf Gefrier- und Paraffinmaterial einzetzbar, Fixierung mit 4% gepuffertem Formalin, Proteinase K- und Formamid-Behandlung vorausgesetzt (s.o.). Für die Durchflußzytometrie wird mit Methanol fixiert, in Formamid erhitzt und mit anti-Maus-IgM:FITC gefärbt.

Sekundärreagenzien:	s.o.

Lagerung:	-20°C

Literatur:
1. Frankfurt O.S. et al. (1987) Exp. Cell Res. 170; 369-380

2. Frankfurt O.S. and Krishan (2001) J. Histochem Cytochem. 49(3); 369-378.

3. Studzinski D.M., and Benjamins (2001) J. Neurosci. Res. 66; 691-697